Deshidratación y Aclaramiento en Procesamiento Tisular

En el procesamiento tisular, la deshidratación y el aclaramiento son las etapas puente entre la fijación y la impregnación en parafina.

Su objetivo es sustituir el agua del tejido por un solvente intermedio (aclarante) miscible con la parafina, sin producir artefactos. Cuando se ejecutan bien, obtenemos bloques limpios, cortes finos y tinciones reproducibles; cuando se ejecutan mal, aparecen grietas, tejido frágil, “burbujeo” y mala coloración.

Objetivo y Alcance

Objetivo: eliminar gradualmente el agua y reemplazarla por un solvente miscible con parafina para permitir una impregnación homogénea.
Alcance: tejidos fijados (idealmente en formol tamponado al 10%) de ≤3–4 mm de espesor, tanto en procesadores automáticos como en flujos manuales.

Fundamento: ¿Qué es Deshidratar y Aclarar?

Deshidratación: sustitución del agua por alcoholes (mezclables con agua). Se realiza de forma gradual para minimizar retracciones y precipitados: 70% → 80% → 95–96% → 100% (absoluto) en varios cambios.
Aclaramiento: sustitución del alcohol por un solvente intermedio miscible con alcohol y con parafina. Además, confiere aspecto translúcido al tejido (de ahí “aclaramiento”).

Reactivos y Material

Alcoholes: etanol 70%, 80%, 95–96% y 100% (dos o más cambios). Alternativas: isopropanol (más lento), alcohol butílico (tejidos duros/óseos).
Aclarantes (intermedios):
- Xileno (estándar de rutina): rápido y eficaz; inflamable y neurotóxico.
- Tolueno: similar al xileno, algo más lento.
- Aclarantes “suaves” (d-limoneno, alifáticos): menos tóxicos, más lentos, dejan olor/film si no se renuevan.
Material: cubetas o canastillas del procesador, termómetro de baño, cronómetro, pinzas, campana de extracción, EPI (bata, guantes, gafas), recipientes ignífugos.

Parámetros Críticos

Espesor de la muestra: ≤3–4 mm (biopsias pequeñas: ≤2 mm).
Relación tejido:reactivo: ≥1:20 (ideal), para evitar arrastre de agua y agotamiento.
Tiempo por etapa: dependerá del tamaño/tejido y del tipo de procesado (manual/automático).
Temperatura: alcoholes a RT; aclarantes a RT o 37 °C (nunca excesivo; evita artefactos y volatilización).
Renovación de reactivos: cambios regulares; mantener etanol absoluto realmente seco (tamices moleculares o lotes nuevos).

Procedimiento Estándar (Orientativo)

Los tiempos son guías para tejido blando de espesor ≤3–4 mm. Ajustar según tamaño, dureza y grasa.

Deshidratación

70% Etanol – 30–45 min
80% Etanol – 30–45 min
95–96% Etanol – 2 × 45–60 min
100% Etanol (Absoluto) – 2–3 × 45–60 min (biopsias: 2 × 20–30 min)

Variaciones útiles

Tejido adiposo: ampliar 1 cambio extra en 96% y en 100% (o usar isopropanol).
Órganos frágiles (ojo/SNC): gradientes más suaves y tiempos algo mayores, evitando temperaturas altas.

Aclaramiento

Xileno – 2–3 × 30–45 min (biopsias: 2 × 10–20 min)
- Alternativas: tolueno (30–60 min) o d-limoneno/alifáticos (tiempos más largos).
Proseguir a impregnación en parafina (generalmente 58–60 °C) con 2–3 cambios de 30–60 min (no es parte del artículo, pero es el paso siguiente).

Punto final del aclaramiento: el tejido se ve traslúcido y firme al tacto con pinzas; no debe “lecharse” al entrar en parafina (signo de alcohol/agua residual).

Comparativa De Aclarantes (Resumen)

Aclarante	Velocidad	Tóxico/olor	Pros	Contras
Xileno	Rápida	Alta	Estándar, resultados consistentes	Toxicidad, VOC, residuos peligrosos
Tolueno	Media	Alta	Buen aclarado	Más lento que xileno
d-Limoneno	Lenta	Media	Menor toxicidad percibida	Olor persistente, puede dejar residuos
Alifáticos “suaves”	Lenta	Baja	Mejor perfil de seguridad	Tiempos más largos, posible ablandamiento

Nota: Use siempre campana de extracción y gestione los residuos como peligrosos.

Señales De Problema y Cómo Corregir

Arrugas o “piel de naranja” en el corte
Causa: deshidratación incompleta.
Solución: reintroducir el taco en etanol absoluto y repetir aclaramiento + parafina.
Huecos (“burbujas”) o áreas pálidas
Causa: agua residual/arrastre, aclaramiento insuficiente.
Solución: repetir 100% etanol (2 cambios) y xileno (2 cambios) antes de reimpregnar.
Tejido quebradizo/demasiado duro
Causa: sobre-deshidratación o exceso de temperatura.
Solución: reducir tiempos, mantener RT, usar alcoholes menos agresivos o rehidratar gradualmente (70% → 95% → 100% breve) y reprocesar.
“Lecheado” al entrar en parafina
Causa: alcohol no totalmente sustituido por aclarante.
Solución: añadir un cambio extra de xileno (o aclarante elegido).
Mala tinción (H&E pálida o irregular)
Causa: procesamiento inhomogéneo.
Solución: revisar espesor, relación reactivo:tejido, renovación de alcoholes/absoluto y tiempos.

Recomendaciones por Tipo de Tejido

Adiposo / Mamario: incrementa el número de cambios en absoluto y aclarante; considera isopropanol previo.
Óseo descalcificado: aumentar tiempos en 96% y 100%; aclarante prolongado.
SNC / Ojo: gradientes suaves; evita temperaturas altas; aclarantes “suaves” pueden ayudar.
Biopsias endoscópicas: tiempos cortos; cambios más frecuentes para evitar sobreprocesado.

Bioseguridad y Gestión de Residuos

EPI obligatorio: guantes, bata, gafas; trabajar en campana.
Inflamabilidad: alcoholes y aclarantes son inflamables; mantener lejos de fuentes de calor/ignición.
Residuos: segregar alcoholes usados y aclarantes como residuos químicos peligrosos; no verter a desagüe.
Salud ocupacional: minimizar exposición a xileno/tolueno; considerar alternativas cuando sea posible.