🧪 ¿Qué Es La Tinción H&E?

La tinción Hematoxilina-Eosina es una técnica histológica que utiliza dos colorantes complementarios:

• Hematoxilina: tiñe los componentes ácidos como el núcleo (color azul/morado).
• Eosina: tiñe los componentes básicos o citoplasmáticos (color rosa/rojo).

Permite diferenciar con claridad núcleos, citoplasmas, fibras, eritrocitos y matriz extracelular.

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🔧 Materiales Y Reactivos

• Hematoxilina (Mayer, Harris o Gill)
• Diferenciador (alcohol ácido)
• Agua corriente o agua amoniacal (bluing)
• Eosina Y o Eosina-Floxina
• Alcohol 70%, 95% y 100%
• Xileno
• Medio de montaje (DPX, bálsamo, etc.)
• Cubetas de tinción
• Porta y cubreobjetos

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🧼 Preparación Inicial: Desparafinado Y Rehidratación

Antes de teñir, el tejido debe quedar libre de parafina y rehidratado.

👉 1. Xileno (2–3 baños, 3–5 min cada uno)

Elimina completamente la parafina.

👉 2. Alcoholes en gradiente

• Alcohol 100%
• Alcohol 95%
• Alcohol 70%

Reduce la concentración hasta llegar al agua.

👉 3. Agua destilada

La muestra debe quedar totalmente hidratada antes de teñir.

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🔵 Paso 1: Tinción Con Hematoxilina

La hematoxilina tiñe los núcleos.

✔️ Proceso estándar

1. Sumergir el porta en hematoxilina (5–10 min, depende del tipo).
2. Lavar en agua corriente (1–3 min).
3. Diferenciar con alcohol ácido: 1–10 segundos.
4. Lavar en agua corriente.
5. Bluing con agua amoniacal o agua corriente prolongada para fijar el color azul.

Resultado esperado: núcleos azul intenso, nítidos y sin halos.

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🌸 Paso 2: Tinción Con Eosina

La eosina tiñe citoplasmas, fibras y eritrocitos.

✔️ Proceso estándar

1. Sumergir en eosina (30 segundos a 2 minutos).
2. Ajustar tiempo según la intensidad deseada:
   • Menos tiempo = rosa más claro
   • Más tiempo = citoplasmas más rojos

Resultado esperado: citoplasmas rosa uniforme y eritrocitos rojo intenso.

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🔄 Paso 3: Deshidratación

Después de teñir, la muestra debe volver a alcoholes para fijar la eosina.

Secuencia clásica:

• Alcohol 70% (breve)
• Alcohol 95%
• Alcohol 100% (dos cambios)

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🌫️ Paso 4: Aclaramiento Con Xileno

El xileno hace la muestra transparente y lista para el montaje.

• 2–3 baños, 2–5 min cada uno.

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🧢 Paso 5: Montaje Final

Colocar medio de montaje y un cubreobjetos.

Resultado final:

• Núcleos azul/violeta bien definidos
• Citoplasmas rosa
• Eritrocitos rojo intenso
• Matriz extracelular rosada
• Preparación transparente y limpia

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❌ Errores Comunes En La Tinción H&E (Y Cómo Evitarlos)

1️⃣ Núcleos demasiado pálidos

Causa: hematoxilina insuficiente o exceso de diferenciación.
✔️ Solución: aumentar tiempo de hematoxilina.

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2️⃣ Citoplasmas demasiado rojos

Causa: tiempo excesivo en eosina.
✔️ Solución: reducir inmersión.

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3️⃣ Preparación azulada en exceso

Causa: bluing prolongado.
✔️ Solución: reducir exposición a agua amoniacal.

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4️⃣ Cristales o manchas

Causa: xileno contaminado o medio de montaje viejo.
✔️ Solución: renovar reactivos.

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5️⃣ Preparación turbia

Causa: deshidratación incompleta.
✔️ Solución: repetir alcoholes al 100%.

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6️⃣ Burbujas bajo el cubre

Causa: montaje apresurado.
✔️ Solución: usar técnica del ángulo y revisar antes de sellar.

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🎓 Consejos Profesionales Para Estudiantes

• Controla el tiempo exacto de cada paso: la H&E es muy sensible.
• Si un tejido se tiñe débil, repite desde hematoxilina (no hace falta empezar desde cero).
• Evita contaminar cubetas: cambia reactivos con frecuencia.
• Nunca dejes la muestra en alcohol ácido más de unos pocos segundos.
• Observa siempre en 10x primero para comprobar que el teñido es uniforme.